Influencia de diferentes situaciones de estrés en la actividad enzimática muscular en bovino de lidia (bos taurus) / Influence of different stressful situations in the muscular enzymatic activity in bullfighting bulls (Bos taurus)

En este estudio se han utilizado 15 bóvidos de la raza de lidia (Bos taurus), divididos en tres grupos, con diferentes edades, características del transporte y condiciones de lidia (machos de 3-4 años lidiados en la plaza de tientas y en plaza portátil y animales de 4 años lidiados en plaza fija), para estudiar el posible efecto de diferentes situaciones de estrés y ejercicio en la liberación de diferentes enzimas musculares. Se tomaron muestras de sangre de todos los animales. En las analíticas sanguíneas se obtuvieron los valores de cortisol y de las enzimas CPK, LDH y AST. En relación con estas enzimas, hubo una mayor liberación de CPK y LDH en los novillos lidiados en plaza de toros portátil, aunque las diferencias no fueron estadísticamente significativas. El comportamiento de la enzima AST no fue el mismo que el de la CPK y la LDH, lo que indicaría según los datos obtenidos en este estudio, que esta enzima no sería un buen indicador del daño o fatiga muscular. Este mayor daño o fatiga muscular se detectó en los animales que se lidiaron en plazas de toros portátiles, sin descanso previo en los corrales. En estos mismos animales, hubo una correlación entre la liberación de cortisol y la de enzimas musculares(AU)

In order to check the possible effect of different stressful situations in the release of different muscular enzymes in fifteen fighting bulls (Bos taurus) divided in three groups according to age, transport characteristics and bullfighting conditions (young bulls fought in a trial bullring and in a portable bullring and bulls fought in a permanent bullring) were used in this study. Samples of blood were taken from all animals. Values of cortisol and CPK, LDH and AST enzymes were obtained from blood samples. A higher CPK and LDH release was detected in young bulls fought in a portable bullring, although statistical differences were not found. The behaviour of the enzyme AST was different from CPK and LDH enzymes, what would indicate, according with the data of the present study, that the values of AST would not be a good indicator of muscular damage or fatigue. This higher muscular damage or fatigue was detected in animals fought in a portable bullring which had not a rest period in pens before the bullfight. In these animals a correlation between the release of cortisol and muscular enzymes was detected(AU)

Haptoglobina como indicador de estrés en vacas de lidia / Haptoglobin as an indicator of stress in lidia breeding cows

Se ha estudiado la influencia del estrés físico y psicológico sobre las concentraciones plasmáticas de la proteína de fase aguda haptoglobina (Hp) en 20 vacas de raza bovina de lidia de 3 a 6 años de edad. Los animalesse dividieron en 4 grupos, el primero, utilizado como control, corresponde a vacas en la ganadería sin estimulación aparente, los tres grupos restantes corresponden a vacas que se utilizaron en encierros tradicionales y que fueron sacrificados a las 30, 54 y 78 horas de la celebración del espectáculo. Las concentraciones medias de Hp en suero para las vacas control fueron 0,093 g/l y 0,13 g/l a las 30h, 0,19 g/l a las 54 h y 0,5 g/l a las 78 h de la celebración del encierro. Estos resultados indican que en los encierros tradicionales se estimula la producciónde Hp en vacas de lidia, presentando valores estadísticamente significativos a partir de las 54 horas de larealización del mismo y situándose los valores máximos a las 78 horas. Como conclusión, hemos de considerarque en situaciones de estrés en vacas de lidia los niveles de Hp en plasma son superiores a los normales y estosparámetros podrían ser utilizados como un indicador del nivel de estrés sufrido por el animal

The influence of physical and psychological stress on the concentration in plasma of the acute phase proteinhaptoglobin (Hp) was studied in 20 fi ghting cows aged 3 to 6 years. Four groups were prepared, the first one orcontrol group comprised live stock with no apparent stimulation. The other groups corresponded to animals oftraditional bull running that were sacrificed at 30, 54 and 78 h after the end of the spectacle. The mean serum Hpconcentration from control fighting cows was 0,093 g/l, while it was 0,13 g/l at 30h, 0,19 g/l at 54 h and 0,5 g/lat 78 h after the end of the spectacle. These results show that in the traditional bull running, Hp concentration is elevated and significant differences are observed at 54 h, although the maximum levels appeared at 78 h. In conclusion, in fighting cows the serum hp concentration was more elevated due to a situation of physical and psychological stress and may be a useful indicator of stress levels in the animal

Comparación de dos métodos para el aislamiento y purificación de la proteína C-reactiva (CRP) canina / Comparison of two methods for canine c-reactive protein (CRPp) isolation and purificaction

La proteína C-reactiva (CRP) es una de las principales proteínas de fase aguda en el perro con un incrementorápido y pronunciado en respuesta a la infección o el daño tisular. Numerosos estudios clínicos yexperimentales indican que el análisis de la proteína ayuda en la evaluación, diagnóstico y monitorizaciónde diversas enfermedades infl amatorias. La disponibilidad de CRP canina pura permitiría su empleo comoestándar en inmunoensayos de la CRP canina o como inmunógeno de cara a la obtención de anticuerpos anti-CRP canina. En el presente trabajo, se aisló la CRP a partir de suero de fase aguda canino, recurriendo a dostécnicas diferentes:1. Inmunopurifi cación, empleando anticuerpos policlonales anti-CRP canina unidos a una matriz de sefarosaactivada con bromuro de cianógeno.2. Cromatografía de afi nidad, usando una columna con fosforiletanolamina unida a agarosa a través deenlace epoxi.La pureza de las proteínas obtenidas con las dos metodologías fue valorada mediante electroforesis engeles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Ambas técnicas son aptas para purifi car la CRP canina, aunque la cromatografíade afi nidad proporcionó un mejor rendimiento tanto en su pureza como en la cantidad de CRP obtenida.Además, la cromatografía de afi nidad es una alternativa más barata, ya que no precisa el uso de anticuerpos, quenormalmente son reactivos de coste elevado

C-reactive protein (CRP) is one of the major acute phase proteins in dogs with a pronounced and rapidincrease in response to infection and tissue injury. Canine CRP analysis has demonstrated to be useful in many clinical and experimental situations for evaluating, diagnosing and monitoring several infl ammatory processes.Purifi ed CRP could be used as a calibrator in immunoassays or as an antigen for producing anti-canine CRPantibodies. In the present study CRP was isolated from canine acute phase serum by using two different techniques:1. Immunopurifi cation, by using polyclonal anti-CRP antibodies bound to CNBr-sepharose.2. Affi nity chromatography on agarose coupled with phosphorylethanolamine through epoxy bound.The purity of the purifi ed proteins with both methodologies was assessed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel eletrophoresis (SDS-PAGE). Both methods could be applied for canine CRP purifi cation, howeveraffi nity chromatography provided a more purifi ed protein and in bigger amount than immunopurifi cationdid and besides constitutes a cheaper option since antibodies, which represent a very expensive stuff, are not needed

Fluorometría en tiempo retardado: Conceptos generales y aplicaciones en medicina veterinaria / Time-resolved fluorometry: General concepts and applications in Clinical Pathology

La fluorometría en tiempo retardado es una tecnología novedosa que surge con la intención de reemplazar al radioinmunoanálisis y se presenta como una posible alternativa al ELISA. Este sistema de detección ha permitido el desarrollo de inmunoensayos altamente sensibles en los que antígenos o anticuerpos son marcados con quelatos de lantánidos, emisores de fluorescencia susceptible de ser cuantificada. Su gran sensibilidad hace que sea una herramienta eficaz en el análisis de compuestos que se encuentran en pequeñas concentraciones en diferentes fluidos orgánicos, tales como orina, sangre o saliva. Los crecientes avances en esta metodología han proporcionado ensayos ultrarápidos y ultrasensibles para la determinación de proteínas de fase aguda y marcadores de infarto de miocardio en medicina humana, mientras que en medicina veterinaria una de sus principales aplicaciones se centra en la determinación de hormonas (AU)

Time-resolved fluorometry is a novel technology that emerges to replace radioimunoassay and appears as a feasible alternative to ELISA. This detection system has led to the development of highly sensitive immunoassays in which antigens or antibodies are labelled with lanthanide chelates, which emit fluorescence capable of being quantified. The high sensitivity makes this technology very useful in the measurement of substances present in small quantities in different organic fluids, such as urine, blood or saliva. Recent advances in fluorometry have provided ultrarapid and ultrasensitive assays for the quantification of acute phase proteins and myocardial infarction markers in human medicine, whereas in veterinary medicine one of its main applications focuses on hormones determination (AU)

Principales aplcaciones de las proteínas de fase aguda en la clínica canina / Main applications of acute phase proteins in canine clinical practice

El término Respuesta de Fase Aguda refleja todos los cambios que se producen en el organismo de un animal tras sufrir una lesión tisular, y que van encaminados a restablecer su homeostasis. Durante el desarrollo de esta respuesta se producen, entre otros cambios, variaciones en los niveles de algunas proteínas plasmáticas, denominándose a éstas de forma general, Proteínas de fase Aguda, entre las que se encuentran la haptoglobina, proteína C reactiva, amiloide A sérico y ceruloplasmina. En perros sanos estas proteínas se encuentran en niveles no detectables o muy bajos; sin embargo, sus concentraciones plasmáticas aumentan rápidamente en respuesta a diversos procesos inflamatorios e infecciosos. Por tanto la aparición de un resultado elevado de alguna de estas proteínas en un animal, sería indicativo de que dicho animal no está sano, y constituiría un aviso para la realización de un estudio clínico-diagnóstico mas detallado. Además van a tener una importante aplicación en la monitorización de la respuesta a los tratamientos empleados, ayudando a determinar la eficacia de los mismos e incluso a predecir la posible existencia de recidivas (AU)

The term acute phase proteins reflects all the changes that occur in the organism after a tissue injury with the purpose of restoring its homeostasis. During this response there is a change in the concentration of some plasma proteins collectively known as acute phase proteins. Some of these proteins are haptoglobin, C reactive protein, serum amyloid A and ceruloplasmin. Healthy dogs have negligible or low levels of these proteins, however their concentrations increase quickly in response to infection or inflammatory conditions. Therefore the appearance of a high result of some of these proteins in a dog would be indicative that this animal it is not healthy and that a secondary detailed diagnostic study should be made. In addition acute phase proteins have an important application in the monitoring of the response to treatment, and they could be an aid to determine the effectiveness of the therapy and to predict possible relapses (AU)

Estabilidad de la actividad colinesterasa en muestras de sangre entera de distintas especies animales sometidas a diferentes condiciones de almacenamiento / Cholinesterase stability of whole blood samples from diverse animal species under different storage conditions

En el presente trabajo se pretende estudiar la estabilidad de la actividad colinesterasa en muestras de sangre entera de diferentes especies animales, y determinar aquellas condiciones de almacenamiento que permitan conservar la actividad de la enzima durante el mayor tiempo posible. Muestras de sangre entera de las especies canina, equina y ovina fueron almacenadas, sin diluir o diluidas al 1:50 en agua destilada, a tres temperaturas diferentes: 25º, 4º y -20º C. La actividad colinesterasa se determinó el día de obtención de las muestras y después de 1 día, 3 días, 1 semana, 2 semanas, 1 mes, 3 meses y 6 meses de almacenamiento, utilizando una adaptación del método de Ellman para el espectrofotómetro automático Coulter Profile Analyzer. Simultáneamente, muestras de sangre entera canina fueron congeladas y descongeladas una vez al día durante cinco días seguidos, con el fin de evaluar su efecto sobre la colinesterasa. La máxima estabilidad de la colinesterasa se observó al conservar la sangre a 20º C en el caso de las especies canina y ovina, y a 4º C en la especie equina. La dilución de las muestras provocó una rápida pérdida de actividad si el almacenamiento se producía a 25º ó 4º C; a -20º C la dilución de la sangre proporcionó mayor estabilidad en la especie ovina, menor en la equina, y similar a la sangre no diluida en la especie canina. Las sucesivas congelaciones y descongelaciones de las muestras de sangre no afectaron de forma significativa a la actividad de la enzima. (AU)

Proteinas de fase aguda: concepts básicos y principales aplicaciones clínicas en medicina veterinaria / Acute phase proteins: general concepts and main clinical applications in veterinary medicine

La respuesta de fase aguda es la reacción que se produce en el animal como respuesta a disturbios de la hemostasia causados por infección, daño tisular, crecimiento neoplásico o desordenes inmunológicos (KUSHNER et al. 1981). Durante el desarrollo de esta respuesta se produce una variación en las concentraciones de ciertas proteínas presentes en el plasma denominadas Proteínas de Fase Aguda, entre las que se encuentran la haptoglobina, proteína C reactiva, amiloide A sérico, ceruloplasmina, alfa1-glicoproteína ácida y el fibrinógeno. Investigaciones realizadas durante los últimos años muestran que la cuantificación de la concentración sérica o plasmática de estas proteínas puede proporcionar una valiosa información clínica en el diagnóstico, la monitorización y el pronóstico de diversas enfermedades (ECKERSALL 2000). (AU)

Influencia de diversas condiciones analíticas en la determinación de colinesterasa en sangre entera mediante el método de Ellman / Influence of several analytical conditions on whole blood cholinesterase activity determination by Ellman method

En este trabajo se pretende estudiar y evaluar las principales fuentes de variación que pueden provocar variabilidad en la determinación de colinesterasa en sangre entera. Para este fin se analizaron alícuotas de sangre entera de perro bajo distintas condiciones analíticas. Se observó un aumento de la actividad colinesterasa conforme se incrementó la temperatura de reacción. La mayor actividad colinesterasa se encontró en un intervalo de pH entre 8.0 y 8.5; sin embargo, una fuerte elevación de la hidrólisis no enzimática del sustrato tiene lugar cuando el pH excede de 7.5, lo que haría recomendable el empleo de pH 7.5. Aunque los valores más elevados de actividad se alcanzaron con una concentración del sustrato acetiltiocolina iodada de 5x10-3 M y de butiriltiocolina iodada de 10x10-3 M, se describió un fuerte aumento de la hidrólisis no enzimática de los sustratos a estas concentraciones, por lo que se prefirió emplear una concentración de ambos sustratos de 1x10-3 M. El cromóforo ácido 5,5’-ditiobis-2-nitrobenzoico, y los sustratos acetiltiocolina iodada y butiriltiocolina iodada, permanecieron estables al menos durante tres meses si eran conservados a una temperatura de -20ºC. Los datos aportados permitirán contribuir a un mejor conocimiento de las fuentes de variación que afectan a la determinación de colinesterasa en sangre entera, y a la estandarización de las condiciones analíticas utilizadas (AU)